目前,上一般按紫外可見分光光度計的儀器結(jié)構(gòu)將其分為
單光束、雙光束、準(zhǔn)雙光束和雙波長四類。
一、單光束紫外可見分光光度計
單光束紫外可見分光光度計只有一束單色光,一只比色皿,一只光電轉(zhuǎn)換器(又稱光接收器)。其光電轉(zhuǎn)換器通常采用硅光電池、光敏三極管或光電管,其結(jié)構(gòu)簡單、價格便宜,但因其雜散光、光源波動、電子學(xué)的噪聲等都不能抵消,故單光束紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度差。單光束紫外可見分光光度計,由于其技術(shù)指標(biāo)比較差,特別是雜散光、光度噪聲、光譜帶寬等主要技術(shù)指標(biāo)比較差,因此,分析誤差也較大。所以,它們在使用上受到限制。一般來講,要求較高的制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗行業(yè)、科研等行業(yè)不適宜使用單光束紫外可見分光光度計。
二、雙光束紫外可見分光光度計
雙光束紫外可見分光光度計就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計。它有兩種類型:一種是兩束單色光,兩只比色皿,兩只光電轉(zhuǎn)換器;另一種是兩束單色光,兩只比色皿,一只光電轉(zhuǎn)換器。目前,國內(nèi)外的雙光束紫外可見分光光度計中,兩只光電轉(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計儀器已很少見,絕大多數(shù)或基本上都是一只光電轉(zhuǎn)換器的儀器,特別是雙光束紫外可見分光光度計,都是一只光電轉(zhuǎn)換器的儀器。這兩種類型的雙光束紫外可見分光光度計,所用的光電轉(zhuǎn)換器基本上全部是光電倍增管(PMT)。
(一)兩只光電轉(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計
使用兩只光電倍增管的雙光束紫外可見分光光度計,光源波動、雜散光、電噪聲的影響都能部分抵消,所以定點(diǎn)測量時,光度準(zhǔn)確度好,但結(jié)構(gòu)較復(fù)雜、價格較貴。同時,因光電倍增管的光譜響應(yīng)特性不可能*配對,所以,光譜掃描時測量誤差很大,一般不用這種雙光束紫外可見分光光度計來掃描。此外,因一束光分成兩束,所以每束光的能量低,信噪比不如單光束紫外可見分光光度計好。目前,我國市場上的TY-1880、TY-8500、UV/FL-1型等儀器屬于此類雙光束紫外可見分光光度計。
?。ǘ┮恢还怆娹D(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計
目前,上的雙光束紫外可見分光光度計都是兩束光、兩只比色皿,一只光電轉(zhuǎn)換器的儀器。如美國的Lambda900、Lambda9、Cary6000、Cary500、Cary5型和日本的UV-2450、UV-3101、U-3400型以及我國的TU-1901、TU-1900、UV-2100、UV-763型雙光束紫外可見分光光度計等都是如此。這類雙光束紫外可見分光光度計的技術(shù)指標(biāo)大多都很先進(jìn)。由于有兩束光,所以對光源波動、雜散光、電子學(xué)噪聲等的影響都能部分抵消,所以其雜散光、光度噪聲都很小。因此,這種類型的雙光束紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度好。這是一只光電轉(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計的zui大優(yōu)點(diǎn)。因一束單色光被分成兩束,所以每束光的能量降低了一半。因此,一只光電轉(zhuǎn)換器的雙光束紫外可見分光光度計的信噪比不如單光束紫外可見分光光度計大。但因兩束光路對噪聲可相互抵消,所以其靈敏度仍然很好。
三、準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計
所謂準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計,就是有兩束光,但只有一只比色皿的紫外可見分光光度計。其中,一束光通過比色皿,另一束光不通過比色皿。不通過比色皿的那束光,主要起抵消光源波動對分析誤差影響的作用。準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計有兩種類型:一種是兩束單色光,一只比色皿,兩只光電轉(zhuǎn)換器;另一種是一束單色光,一束復(fù)合光,一只比色皿,兩只光電轉(zhuǎn)換器。
(一)兩束單色光
這種準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計比較多見。目前國內(nèi)外市場上或用戶正在使用的準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計,基本上都是這種類型的儀器。這種準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計,一般都用硅光電池或光電管作光電轉(zhuǎn)換器。不通過比色皿的這一束光,除作為參考光束外,還有一個很重要的作用,就是用來抵消光源波動,以提高儀器的穩(wěn)定性。這種儀器的結(jié)構(gòu)也較簡單,價格較便宜。
我國企業(yè)目前正在生產(chǎn)的TU-1800、TU-1800S、TU-1800PC、TU-1800SPC、UV-762、UV-1600等紫外可見分光光度計,就是兩束單色光,一只比色皿,兩只光電轉(zhuǎn)換器的準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計。因其有兩束光,所以光源波動可抵消一部分,電子學(xué)噪聲也可部分抵消(因只有一個比色皿,雜散光不能抵消),故準(zhǔn)確度較單光束儀器好。它屬普及型的常規(guī)儀器。
?。ǘ┮皇鴨紊?一束復(fù)合光
這種結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計,不通過比色皿的那束參考光束為復(fù)合光,它不經(jīng)過分光器,直接進(jìn)入光電轉(zhuǎn)換器。所以,參考光束的能量比較大(要比樣品光束強(qiáng)得多),經(jīng)過光電轉(zhuǎn)換器后,電信號也比較強(qiáng)。因為兩束光的強(qiáng)度相差太多,復(fù)合光的強(qiáng)度過大,單色光的強(qiáng)度較小,很難達(dá)到抵消光源波動對分析誤差影響的作用,甚至加大這種影響。目前,一束單色光和一束復(fù)合光的準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計已很少見。
四、雙波長紫外可見分光光度計 雙波長紫外可見分光光度計都采用兩個單色器。光源發(fā)出的光被兩個單色器分別分離出波長為λ1和λ2,通過斬波器將兩束單色光λ1和λ2交替入射到同一試樣中,光電倍增管交替地接收到經(jīng)過試樣吸收后的這兩束單色光,并把它們變成電信號。
雙波長紫外可見分光光度計主要適用于求出試樣中待測組分的含量或濃度。如果試樣中有共存干擾吸收物質(zhì),則可采用等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法測量。如果試樣的吸收光譜上,有兩個或兩個以上組分的吸收峰互相重疊或非常接近,或者有很大的渾濁背景吸收干擾,則可利用導(dǎo)數(shù)光譜來分析測試。